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基因敲除大/小鼠定制

2018-02-24 04:12:08来源:丁香园 作者:丁香通讯员

模式动物对于生命科学、人类医药和健康研究领域的发展有着不可或缺的作用,邦耀生物模式动物实验室拥有多年基因编辑动物经验,可以高效准确地为您提供优质的模式动物技术服务,包括基因敲除大/小鼠,Cas9 条件敲除大/小鼠,基因敲入大/小鼠,转基因大/小鼠等模式动物的定制。

运用 CRISPR/Cas9 或 TALEN 技术进行基因敲除大鼠或小鼠动物模型的制备。邦耀生物长期从事基因敲除/敲入大鼠、小鼠相关工作,团队成员在《Nature Biotechnology》、《Nature protocols》、《Nucleic Acids Research》等国际知名杂志发表高水平文章。
 
本公司可通过 CRISPR/Cas9 和 TALEN 技术进行基因敲除大小鼠及条件敲除小鼠的制备工作,获得 Founder 仅需 2~3 个月,获得稳定遗传的 F1 代最快仅需 4 个月。

基因敲除大/小鼠

Cas9 技术路线图


Nature Protocols 2014 (10):2493-512

服务项目及周期
1.靶点设计、载体构建、显微注射、首建鼠基因型鉴定 
2.提供不少于 3 只 F1 代大小鼠 
3.F0 代鼠仅需 2 个月、F1 代最快仅需 4 个月 

 

条件敲除大/小鼠定制

(1)运用 CRISPR/Cas9 系统进行大鼠或小鼠条件基因敲除模型构建:设计两条 sgRNA 及带有 Loxp 位点的同源重组模板,利用 CRISPR/Cas9 介导的同源重组,在靶基因特定外显子两侧的内含子中各敲入一段方向相同的 LoxP 序列,在 Cre 重组酶的作用下,两个 LoxP 位点间的靶基因被切除,起到条件敲除靶基因的作用。


在 Tgr5 基因座两侧整合一对同向的 LoxP 序列,经 Cre 酶重组后删除 Loxp 位点之间的序列

 


Nature Protocols 2014 (10):2493-512

服务项目及周期
1.靶点设计、载体构建、显微注射、首建鼠基因型鉴定 
2.提供不少于 3 只以上 F1 代大小鼠 
3.F0 代鼠构建 4~6 个月,F1 代 6~8 月

(2)条件敲除同时兼具报告基因功能的小鼠、大鼠构建:利用 CRISPR/Cas9 介导的同源重组在内含子中定点敲入反向的带有剪切接受子 SA、绿色荧光蛋白 GFP 和转录终止信号 polyA 的片段,并在片段两侧插入两对交错排列的 lox66 和 lox71 序列。在 Cre 重组酶的作用下,插入片段被倒转为正向序列,使反向插入的 DNA 片段形成一个新的外显子,融合表达 GFP 报告基因同时终止内源基因的转录,起到敲除靶基因同时标记被敲除细胞的效果。

 


在 Lgr5 基因座整合倒置的 SA-GFP-polyA 元件

 


SA-GFP-polyA 功能的鉴定

Scientific Reports 2015,5:17517

服务项目及周期
1.靶向目标序列的 Guide RNA 设计、重组同源臂设计构建、显微注射、 F0 代鉴定
2.提供不少于 3 只 F1 代大小鼠
3.F0 代鼠构建 4~6 个月、F1代 6~8 个月
获得 F1 代杂合子后进行 PCR 及测序鉴定,提供不少于 3 只阳性 F1 代杂合子