固相抗体芯片

Western Blot 一直是蛋白半定量检测的常用技术,然而 Western Blot 需要进行制胶、电泳、转膜、抗体孵育、显色和成像,操作过程复杂且需要进行条件优化,得到一次较好的实验结果耗时良久。R&D Systems 公司提供的 Proteome Profiler™固相芯片,能达到和 WB 相同的实验结果,但却无需繁琐的实验步骤,一次即可实现最多达百种以上蛋白检测,成为蛋白半定量的最佳筛选工具。


Proteome Profiler 这种基于膜的抗体芯片,包含针对高达 119 种分析物的捕获抗体,以双份的形式点在硝酸纤维素膜上。每块芯片都是为分析特定的蛋白家族或细胞过程而设计的。这些芯片所产生的数据范围广,可以发现意想不到的细胞反应,如信号通路之间的串扰或脱靶的药理作用。芯片也能避免耗时的凝胶电泳和膜转移步骤,而这些在 Western blot 中是必需的。此外,芯片不需要任何特殊设备,数据采集和分析与传统 WB 相同,也可用 LI-COR®检测系统。

特点

● 重要文献中引用次数近 700 次
● 可同时检测上百种分析物
● 比 Western blot 更简单,更灵敏
● 无需特殊实验设备
● 手工操作时间为 3 小时

检测原理

基于膜的抗体芯片的检测原理。利用固定在硝酸纤维素膜上的抗体来捕获细胞裂解液中的特定蛋白。利用生物素化的检测抗体混合物和链霉亲和素-HRP,或与 HRP 结合的泛磷酸化酪氨酸抗体来检测目标蛋白。通过化学发光来观察结合的分析物。

(1)筛选乳腺癌磷酸化蛋白

T47D 细胞中激酶磷酸化的诱导和抑制。T47D 人乳腺癌细胞系未经处理,或用 100 ng/mL Recombinant Human EGF(货号 236-EG) 处理 15 分钟,或在 EGF 处理前用 MEK 抑制剂 PD 0325901(10 μM;Tocris;货号 4192)、PD 98059(20 μM;Tocris;货号 1213)、SL 327(10 μM;Tocris;货号 1969) 或 U0126(10 μM;Tocris;货号 1144) 预处理 2 小时。利用 Proteome Profiler Human Phospho-Kinase Array(货号 ARY003B) 确定蛋白磷酸化状态。膜在 X 射线胶片上曝光 (A),直方图是通过像素密度测定 (B) 产生的。

(2) 筛选白血病细胞因子图谱


利用 Proteome Profiler™ Mouse XL Cytokine Array Kit(货号 ARY028) 测得的白血病细胞刺激前后的细胞因子分泌图谱。

(3)筛选软骨肉瘤中蛋白酶的变化


软骨肉瘤细胞中蛋白酶的诱导。软骨肉瘤细胞未 经 处 理 (A), 或 用 IL-1α(货 号 200-LA) 和 Recombinant Human OSM (货号 295-OM) 处理 (B)。利用 Proteome Profiler Human Protease Array(货号 ARY021B(确定蛋白酶表达水平。膜在 X 射线胶片上曝光,直方图是通过像素密度测定 (C) 产生的。

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文献

1.Hemant K. Bid, Ryan D. Roberts, et al. △Np63 Promotes Pediatric Neuroblastoma and Osteosarcoma by Regulating Tumor Angiogenesis. Cancer Res, 74(1) January 1, 2014

2.Zemskova, M., Song, J., Cen, B. et al. Regulation of prostate stromal fibroblasts by the PIM1 protein kinase. Cell Signal. 2015 Jan;27(1):135-46. [引用产品货号:ARY005, ARY001]

3.Cho YL, Hur SM, et al. Specific activation of insulin-like growth factor-1 receptor by ginsenoside Rg5 promotes angiogenesis and vasorelaxation. J Biol Chem. 2015 Jan 2;290(1):467-77. [引用产品货号:ARY003B]

4.Lalani, A., Moore, C. et al. Myeloid cell TRAF3 regulates immune responses and inhibits inflammation and tumor development in mice. J Immunol. 2015 Jan 1;194 (1):334-48. [引用产品货号:ARY006]

5.Ariestanti, D., Ando, H., et al. Targeted Disruption of Ig-Hepta/Gpr116 Causes Emphysema-like Symptoms That Are Associated with Alveolar Macrophage Activation. J Biol Chem. 2015 Apr 24;290(17):11032-40. [引用产品货号:ARY006]

6.Wang, J., Mikse, O., et al. Ligand-associated ERBB2/3 activation confers acquired resistance to FGFR inhibition in FGFR3-dependent cancer cells. Oncogene. 2015 Apr 23;34(17):2167-77. [引用产品货号:ARY001B]

7.Man, J., Shoemake, J. et al. Hyperthermia Sensitizes Glioma Stem-like Cells to Radiation by Inhibiting AKT Signaling. Cancer Res. 2015 Apr 15;75(8):1760-9. [引用产品货号:ARY003B]

8.Annemann, M., Wang, Z. et al. IkappaBNS regulates murine Th17 differentiation during gut inflammation and infection. J Immunol. 2015 Mar 15;194(6):2888-98.[引用产品货号:ARY006]

9.Montero, J., Esparis-Ogando, A., et al. Active kinase profiling, genetic and pharmacological data define mTOR as an important common target in triple-negativebreast cancer. Oncogene. 2014 Jan 9;33(2):148-56. [引用产品货号:ARY001B]

10.Stommel, JM., Kimmelman, AC., et al. Coactivation of receptor tyrosine kinases affects the response of tumor cells to targeted therapies. Science. 2007 Oct 12;318(5848):287-90. [引用产品货号:ARY001]

11.Engelman, JA., Zejnullahu, K., et al. MET amplification leads to gefitinib resistance in lung cancer by activating ERBB3 signaling. Science. 2007 May 18;316(5827):1039-43. [引用产品货号:ARY001]

 

 

 

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