意得辑国际科研发表学院

通过前期的早期初筛，经过生物信息学分析，会筛选到具有统计学意义的一部分具有表达差异的蛋白。这些蛋白需要经过进一步的优化，寻找到与疾病或某些通路有关的具有表达差异的蛋白，进一步缩小蛋白范围，这时就需要使用结果更为准确的蛋白定量或鉴定工具。

经过优化后，需要对得到的更小范围生物标志物进行大样本量的验证，最终确定哪些生物标志物可以用于疾病诊断、判断疾病分期或者用来评价新药或新疗法在目标人群中的安全性及有效性等。目前常用的生物标志物检测工具有 Luminex^®high performance assay，Ella^TM 全自动多因子免疫检测系统，ELISA 免疫试剂盒，应用抗体的检测方法（WB、IHC、ICC 等）和中和/封闭抗体等。

我们提供多种生物标志物优化和验证工具：
1.Luminex^® 液相抗体芯片
2.Ella^TM 全自动多样本多因子免疫检测系统
3.ELISA 试剂盒
4. 高性能的抗体
5. 封闭/中和抗体

1.Luminex 液相抗体芯片
ELISA 实验能够很好的对蛋白进行精确定量且操作简单，然而需要同时检测多个样本的多个因子时，ELISA 需要多次重复相同的步骤，不能很快的得到实验结果。Lumimex 液相芯片，以 ELISA 三明治夹心原理，利用微球和基于流式细胞仪原理的 Lumimex 仪器相结合的技术，采用 ELISA 板的形式实现多样本验证，在单孔中同时检测多个蛋白指标，进行精确定量。

Luminex 液相抗体芯片技术采用不同颜色编码的微球，包被相应的特异性抗体，在一个孔可同时检测多达 100 种分析物，利用 96 孔板作为反应板，实现高通量的蛋白精确定量。R&D Systems 公司有 15 年 Luminex 试剂盒的研发历史，具有丰富的免疫检测经验，采用与 ELISA 试剂盒质量一致的抗体对和缓冲液体系优化，在「金标准 ELISA」的基础上，提供最高标准和最优性能的 Luminex 多重检测试剂，对多个生物标志物进行定量和筛选。

特点

灵活：根据客户需求，可同时检测多达 100 种指标物
性价比高：相比于单因子检测，成本更低
选择性多：可检测 的指标种类数不断增加，部分因子是 RD&Sysems 公司独有
实验操作简单：整个实验流程在 3～3.5 小时内完成
同时检测多个指标所需的样本量极少（<50 μL）

实验原理

应用

（1）不同乳腺癌细胞系分泌细胞因子谱分析

乳腺癌细胞系分泌因子表达谱。MCF-7, MDA-MB-231, SK-BR-3, T47D 和 ZR-75-1 乳腺癌细胞系培养后收集细胞上清，利用 99 因子的 Luminex Assay 进行检测。其中，68 个因子浓度较低检测不到。表中 31 因子数值单位为 pg/mL。标准曲线按照 1:3 梯度稀释，范围从 1:1-1:243。

（2）检测充血性心力衰竭病人血清生物标志物

在充血性心力衰竭疾病患者体内，进一步优化生物标志物组合，检测其中 6 种指标。选取充血性心力衰竭病人 10 个，健康人 20 个，利用 Luminex High Performance Human Cardiac Panel A (货号 LUCA000) 检测 TNF RII/TNFRSF1B、ST2/IL-1 R4、CD40 Ligand、FailureProprotein Convertase 9/PCSK9、GDF-15 和 PAPP-A，其中 PAPP-A 在所有样本中浓度低于最低检测限。

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文献

1.Anaïs Levescot, Stéphane Flamant, et al. BCR-ABL–Induced Deregulation of the IL-33/ST2 Pathway in CD34(+) Progenitors from Chronic Myeloid Leukemia Patients.Cancer research. 2014 May 15; 74: 2669.

2.Myers, N., Chantratita, N., et al. The role of NOD2 in murine and human melioidosis. J Immunol. 2014 Jan 1; 192(1): 300-7.

3.Dubsky, M., Jirkovska, A., et al. Role of serum levels of angiogenic cytokines in assessment of angiogenesis after stem cell therapy of diabetic patients with critical limb ischemia. Cell Transplant. 2014; 23(12): 1517-23.

4.Garg, , Abhishek., Dudek, Aleksand., et al. ROS-induced autophagy in cancer cells assists in evasion from determinants of immunogenic cell death. Autophagy. 2013 Sep; 9(9): 1292-307.

5.David M., Charytan, Robert Padera, et al. Increased concentration of circulating angiogenesis and nitric oxide inhibitors induces endothelial to mesenchymal transition and myocardial fibrosis in patients with chronic kidney disease. J Immunol. 2014 Sep; 176(1): 99-109.

6.Richard Fuerstenberg, Shaya Anderson, et al. Multiplex analysis of secreted biomarkers from stimulated natural killer cells (INC6P.337). J Immunol. 2014 Sep; 176(1):99-109. 2014 May 1; 192(1): Supplement 121.4.

7.Yurkovetsky Z., Skates S., et al. Development of a multimarker assay for early detection of ovarian cancer. J. Clin. Oncol. 2010; 28(13): 2159-66.

8.Nolen B., Breen E., et al. Circulating mediators of inflammation and immune activation in AIDS-related non-hodgkin lymphoma. PLoS ONE. 2014; 9(6): e99144.

9.Grote VA., Kaaks R., et al. Inflammation marker and risk of pancreatic cancer: a nested case-control study within the EPIC cohort. Br. J. Cancer. 2012; 106(11): 1866-74.

10.Chantratita N, Tandhavanant S., et al. Survey of innate immune responses to Burkholderia pseudomallei in human blood identifies a central role for lipopolysaccharide. PLoS ONE. 2013; 8(11): e81617.

11.Madsen C, Steffensen K., et al. Serial measurements of serum PDGF-AA, PDGF-BB, FGF2, and VEGF in multiresistant ovarian cancer patients treated with bevacizumab.JOvarian Res. 2012; 5(1): 23.

12.Chantrathammachart, P. Mackman, N., et al. Tissue factor promotes activation of coagulation and inflammation in a mouse model of sickle cell disease. Blood. 2012 Jul 19;120(3): 636-46.

13.Vuillermot, S. Joodmardi, E., et al. Prenatal immune activation interacts with genetic Nurr1 deficiency in the development of attentional impairments. J Neurosci. 2012 Jan 11;32(2): 436-51

2.Ella™ 全自动多样本多因子免疫检测系统

ELISA 是免疫检测的经典方法，一直被科研工作者作为蛋白定量的金标准。对于大样本量的生物标志物检测来讲，手动操作所需要的人力、物力等更多。Ella™ 全自动免疫检测系统是将 ELISA 方法与全自动系统相结合，实现蛋白的全自动定量检测。

检测浓度范围更宽，灵敏度更高

全球部分用户

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3.ELISA 试剂盒

常规的进行生物标记物蛋白验证及定量的方法有 ELISA。R&D Systems 公司拥有近 30 年致力于研发、测试和优化免疫分析试剂盒的经验，已成为世界公认的金标准。目前，我们提供超过千种 ELISA 试剂盒，可分析的物种包括人、小鼠、大鼠、犬、灵长类和猪等，广泛应用于胞外分泌型蛋白和胞内通路蛋白及磷酸化蛋白的定量检测。这些基于 ELISA 的形式为优化您的实验条件和明确最佳的方法带来了一种更高效的方式。

特点
● 检测物丰富：拥有超过 1,800 种试剂盒，种类丰富
● 高准确性：金标准 ELISA 试剂盒，保证检测的精确度和准确性
● 灵活：胞内、胞外蛋白均可检测，拥有即用型试剂盒和研发型试剂盒，供不同客户选择
● 实验操作简单：整个实验流程在 5 小时内完成

三明治式免疫检测的原理。利用固定化抗体来捕获细胞裂解液中目的蛋白，之后加入 HRP 标记的捕获抗体，最后底物显色，酶标仪数据收集。

应用
（1) 脂联素 (adiponectin) 与肥胖相关多发性骨髓瘤 (MM) 呈负相关

检测 174 MM 病人和 348 正常对照的血清，进行总脂联素 Total adiponectin(货号 DRP300)、大分子脂联素 HMW adiponectin(货号 DHWAD0) 和瘦素 Leptin(货号 ARY028) 三种指标的检测。发现总脂联素和大分子脂联素，与 MM 呈负相关，而瘦素无相关性。

检测不同类型高龄糖尿病人血清中炎症因子的水平

伴随抑郁或轻度认知障碍 (MCI) 的高龄糖尿病人出现抑郁症状与血清内高浓度炎症因子有关。同时抑郁并患有 MCI 的病人血清内炎性因子出现累加效应。利用 Quantikine^® Human Immunoassay ELISA kit 检测 CRP (货号 DCRP00), IL-6 (货号 D6050) 和 TNF-α(货号 DTA00C) 三种炎症标记物在不同类型样本中的浓度。A: 57 个伴有抑郁症状的糖尿病人；B：25 个同时伴有抑郁症状和轻度认知障碍的糖尿病人；C：62 个患有轻度认知障碍的糖尿病人；D：132 个对照。

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4. 高性能的抗体
我们拥有超过 250,000 种 Novus Biologicals^®和 R&D Systems^®抗体。我们的抗体 100% 保证适用于列出的应用和物种，因此您将始终对结果充满信心。

特点
● 市场上最大的产品库
● 数百个内部开发的独特克隆
● 超过 15,000 个抗体，针对独特的目标分子
● 超过 20 万幅数据图像和 2 千个客户评论
● 超过 50,000 个标记的一抗，针对 3,000 个独特的目标分子
● 全新推出重组单克隆抗体，特异性更强

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5. 封闭/中和抗体
R&D Systems 提供超过 1,200 种封闭/中和抗体，可对已筛选的生物标志物做封闭/中和实验，验证其生物学功能。

特点
● 经过多种实验验证，解除活化抑制
● 内毒素含量低，避免出现非特异性细胞反应
● 近千篇文献引用
● 抗原亲和纯化，保证高特异性

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