尿液细胞生成器官？大牛的实验思路我永远跟不上
作为国货之光的华为最近又被推到了风口浪尖，鲜在媒体露面的任正非上周在华为总部接收了一众中外媒体的采访。在采访中，任正非说「我们最重要的还是把自己能做的事情做好」，大家之言总是醍醐灌顶。
作为在 99% 失败和偶然 1% 成功的类器官研究领域奋斗的小学徒，当前能做好的就是博览大牛 paper 增学识，网罗八方秘籍涨技能。
大牛神操作：
尿液细胞生器官？肠道极性反转？
最近，类器官研究大拿 Hans Clevers 教授团队从健康志愿者和囊性纤维化（CF）患者的尿液中离心获得细胞沉淀物，采用包埋大法，3D 培养细胞获得「tubuloids」类器官[1]。
该患者来源的类器官对特定的药物敏感。尿液衍生的类器官可以作为疾病模型，完美还原病人组织的真实病理特征，是药物筛选或者体外诊断的重要方向。
Hans Clevers 教授团队开创性地使用 R&D Systems® 的 I 型胶原（Cultrex® 3D Culture Matrix Rat Tail Collagen I）构建出类器官的进阶版本——器官芯片（Organ-on-a-chip），并利用此平台检测跨上皮转运和药物处置功能。
微流体培养的器官芯片[1]
现在热门的肠道类器官可以与真实的生理状态类似，形成肠道内腔，并还原出内外侧细胞极性，但是常规研究内腔细胞的实验方法如显微注射操作耗时而繁琐。
为解决该问题，另一位类器官的大牛—— Calvins J. Kuo 和其他实验室合作，利用整合素 β1 在 R&D Systems® BME 基质胶（Type II 低生长因子版，货号：3533-001-02）中成功培养出极性反转的肠道类器官[2]。
让内腔细胞可以直接暴露在外，从而构造了操作简便的肠腔研究模型，并通过脂肪酸吸收、鼠伤寒杆菌侵袭和李斯特氏菌感染三个实验验证功能，该模型在评估屏障完整性、监控营养摄取和检测细菌感染等领域具有广泛的应用前景。
极性反转肠道类器官模型[2]
如何优雅的完成类器官实验？
一、类器官的培养
将 R&D Systems® Cultrex® Reduced Growth Factor BME（低生长因子版，货号 3533-010-02）及类器官置于冰上或 4 ℃，而培养板需要在 37 ℃ 预热，以诱导 BME 快速聚合，防止类器官接触培养板底部。
BME 融化后与类器官按一定比例混和（如培养胃类器官为 10,000 类器官细胞/mL），推荐使用 6 孔板，在每个孔中滴加 6~8 个 50 μL 的类器官-基质胶团（如果使用 24 孔板推荐每个孔只加一个胶团）。
将孔板放置于 37 ℃ 培养箱中，待基质胶凝固后，每个孔加入 3 mL 的培养基。
二、类器官的收获和传代
去除培养基，每个孔使用 5 mL 的 4 ℃ PBS 洗涤，随后用 5 mL 4 ℃ R&D Systems® Cultrex 类器官收获液（货号 3700-100-01）孵育 30~60 分钟，并在低温环境下轻轻晃动孔板使基质胶充分溶解。
基质胶完全溶解后使用 20 号的注射器将类器官细胞冲洗打散，并转移到离心管中，在 500 xg 4 ℃ 下离心收集，再用 5~10 mL 的 4 ℃ PBS 清洗细胞并再次离心，最后将基质胶与类器官细胞混合并再次滴加到孔板上。
三、选择优质基质胶
大牛 Hans Clevers 和 Calvins J. Kuo 盖章认证的基质胶，想试试吗？R&D Systems® 的基质胶可广泛应用于包括支持细胞生长和分化、细胞粘附、血管新生、体外细胞迁移/侵袭、体内成瘤等在内的多个领域。
目前，R&D Systems®部分 BME 现货产品低至 5.5 折，价格不受贸易战影响，产品无需等待，更有知名品牌咖啡券相赠。
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参考文献：
[1] Schutgens F, et al. Tubuloids derived from human adult kidney and urine for personalized disease modeling. Nat Biotechnol. 2019 Mar;37(3):303-313.
[2] Co JY, et al. Controlling Epithelial Polarity: A Human Enteroid Model for Host-Pathogen Interactions. Cell Rep. 2019 Feb 26;26(9):2509-2520.e4.
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