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Western Blot 一直是蛋白半定量检测的常用技术，然而 Western Blot 需要进行制胶、电泳、转膜、抗体孵育、显色和成像，操作过程复杂且需要进行条件优化，得到一次较好的实验结果耗时良久。R&D Systems 公司提供的 Proteome Profiler™固相芯片，能达到和 WB 相同的实验结果，但却无需繁琐的实验步骤，一次即可实现最多达百种以上蛋白检测，成为蛋白半定量的最佳筛选工具。

Proteome Profiler 这种基于膜的抗体芯片，包含针对高达 119 种分析物的捕获抗体，以双份的形式点在硝酸纤维素膜上。每块芯片都是为分析特定的蛋白家族或细胞过程而设计的。这些芯片所产生的数据范围广，可以发现意想不到的细胞反应，如信号通路之间的串扰或脱靶的药理作用。芯片也能避免耗时的凝胶电泳和膜转移步骤，而这些在 Western blot 中是必需的。此外，芯片不需要任何特殊设备，数据采集和分析与传统 WB 相同，也可用 LI-COR®检测系统。

特点

● 重要文献中引用次数近 700 次
● 可同时检测上百种分析物
● 比 Western blot 更简单，更灵敏
● 无需特殊实验设备
● 手工操作时间为 3 小时

检测原理

基于膜的抗体芯片的检测原理。利用固定在硝酸纤维素膜上的抗体来捕获细胞裂解液中的特定蛋白。利用生物素化的检测抗体混合物和链霉亲和素-HRP，或与 HRP 结合的泛磷酸化酪氨酸抗体来检测目标蛋白。通过化学发光来观察结合的分析物。

（1）筛选乳腺癌磷酸化蛋白

T47D 细胞中激酶磷酸化的诱导和抑制。T47D 人乳腺癌细胞系未经处理，或用 100 ng/mL Recombinant Human EGF(货号 236-EG) 处理 15 分钟，或在 EGF 处理前用 MEK 抑制剂 PD 0325901(10 μM；Tocris；货号 4192)、PD 98059(20 μM；Tocris；货号 1213)、SL 327(10 μM；Tocris；货号 1969) 或 U0126(10 μM；Tocris；货号 1144) 预处理 2 小时。利用 Proteome Profiler Human Phospho-Kinase Array(货号 ARY003B) 确定蛋白磷酸化状态。膜在 X 射线胶片上曝光 (A)，直方图是通过像素密度测定 (B) 产生的。

（2) 筛选白血病细胞因子图谱

利用 Proteome Profiler™ Mouse XL Cytokine Array Kit(货号 ARY028) 测得的白血病细胞刺激前后的细胞因子分泌图谱。

（3）筛选软骨肉瘤中蛋白酶的变化

软骨肉瘤细胞中蛋白酶的诱导。软骨肉瘤细胞未 经 处 理 (A)， 或 用 IL-1α(货 号 200-LA) 和 Recombinant Human OSM (货号 295-OM) 处理 (B)。利用 Proteome Profiler Human Protease Array(货号 ARY021B(确定蛋白酶表达水平。膜在 X 射线胶片上曝光，直方图是通过像素密度测定 (C) 产生的。

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